用拍击式无菌均质器获取大量单个细胞的方法(仅供参考):
拍击式无菌均质器广泛应用于食品微生物分析;动物组织、生物样品、化妆品的均质处理;肉、鱼、蔬菜、水果、饼干;药品的微生物分析等。固体样品中提取细菌的过程变得操作简单,只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中,然后将样品袋放入拍打式均质器中即可完成样品的处理。减少了样品的处理和准备时间,处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析,没有样品的变化和交叉污染的危险。
将手术中切取的肿瘤组织(如胃癌、大肠癌、乳腺癌)放在无菌平皿中,用含有庆大霉素100U/ml的生理盐水洗涤,去除组织上粘附的细菌,洗3次后按2g重量加入10ml生理盐水,用剪刀剪成小块,尽量小些,2-5mm见方均可,装入均质袋中。
按拍击式无菌均质器使用说明书的方法进行操作,技术参数为10次/秒5-10分钟,每分钟停1分钟,计算累记分钟,不同组织使用时间稍有不同。再将处理后的组织混合物吸入试管中,静置3-5分钟,取澄清的部分细胞悬浊液,内含大量单个分散细胞,1000转/分离心5分钟,加入含20%小牛血清培养液,可以直接培养,细胞数可以调节在2×105ml左右,总细胞数随组织块大小可以有变化,但培养用细胞足够多。
观察到图片中单个圆形细胞为所需要的被分散的单细胞,包括腺体细胞及上皮类细胞,不规则梭形细胞为打散的肌纤维细胞,也是分散的单细胞。都有完整圆润的细胞形态,活性很好